江苏金普诺安生物科技股份有限公司

蛋白酶K 分子生物学级重组酶制剂

本产品来源于经过定点突变优化的林伯氏白色念球菌（Engyodontium album）蛋白酶 K基因的酵母表达产物。

货号:GPK003001/2
CAS No:39450-01-6	E.C.:3.4.21.64
其他名称: 肽酶 K，内肽酶 K，蛋白内切酶K

产品特性

分子量	29.3 kDa
pI	8.9
pH 值范围	4.0-12.0
活性最适 pH 范围： 7.5-11.5
储运温度	建议-20 °C保存以最大程度保证活性稳定。金普诺安蛋白酶K冻干粉和液体制剂稳定性强，常温运输不会造成酶活降低。
性状	冻干粉和液体
温度特性	最高活性温度70 °C 建议使用温度范围37-70°C
比活性	≥ 34 单位/毫克干粉
单位活性定义: 在37ºC pH 7.5条件下，每分钟可水解酪蛋白底物生成 1 µmol酪氨酸的蛋白酶 K 的量定义为一个单位（U）。每批次产品的酶活值见相应质检报告。

单位活性定义:

本品未检出脱氧核糖核酸酶（DNase）和核糖核酸酶（RNase）
以 λ DNA为底物于37ºC消化 6小时以上未检测到DNase活性。
以 λ DNA为底物于25ºC消化 16小时以上未检测到RNase活性。
每批次均进行各项检测以便确定不含核酸酶、DNA及RNA。

产品描述

基本情况
蛋白酶 K是一种广谱丝氨酸蛋白酶，最早从真菌白色侧齿霉Engyodontium album里分离纯化出来。因为该酶可以降解角蛋白（Keratin），于是被命名为蛋白酶 K。蛋白结晶及分子结构学研究表明该酶属于枯草杆菌蛋白家族（subtilisin family），活性位点具有特征性催化三联氨基酸Asp39-His69-Ser224。蛋白酶 K并没有显著的底物特异性，主要切割位点为脂族或芳香族等厌水性氨基酸的羧基端的肽键。

应用
蛋白酶 K可以应用于任何蛋白水解的场合，目前主要在分子生物学方面应用于纯化制备高度保持天然状态的核酸，去除蛋白质污染。蛋白酶 K在变性剂存在的严苛条件下仍然能够保持迅速并高效地降解灭活核酸酶的特性，最大程度上避免了纯化过程中核酸酶对DNA及 RNA的降解和损伤，从而保证纯化核酸产物的完整性。

蛋白酶 K在含有1% Triton X-100 和0.5% (w/v) SDS的蛋白质变性溶液中依然保持活性，提高了对变性伸展蛋白底物的切割效率。

蛋白酶 K 在浓度2-20 mg/mL、pH 7.5-11.0、 37-70 °C条件下体现出最佳活性。

通常采用酚抽提的方式来灭活并去除蛋白酶 K。

蛋白酶 K作用时间根据需求可为30分钟到18小时不等，长时间反应会出现蛋白酶 K自我降解现象。

重组蛋白酶 K的优势
金普诺安重组蛋白酶 K是在天然蛋白酶中引入特异性点突变并在酵母中高效表达的基因工程产物，有效地提高了酶的比活性和更广的作用温度及pH范围，在70摄氏度和pH-11仍然具有很高活性。

大规模量产的重组酶生产技术让产品在批次稳定性、高纯度及降低单位价格等方面都具有显著优势。无DNA污染、不含核酸酶的高纯度特性使之成为纯化DNA和RNA模板的最佳选择。重组蛋白酶 K广泛应用于分子生物学、分子诊断学及生物制药业等领域中去除蛋白质以及蛋白质水解制备多肽和氨基酸方面。金普诺安重组蛋白酶的高温和高pH活性，有助于高温下对打开蛋白质折叠结构的蛋白质进行高效切割，更有效降解去除蛋白质，更加适合工业化生产条件下的应用需求。

制备方法

激活剂	1-5 mM Ca²⁺
反应体系中添加1-5 mM Ca²⁺可以提高蛋白酶 K活性。恰当使用激活剂可以大幅度提高蛋白酶活性。加入EDTA去除钙离子的情况下，酶活性会降低25%。而EDTA-Ca²⁺ 螯合产物通过凝胶过滤从反应体系中去除之后酶活性则会降低80%，重新添加大量Ca²⁺可以恢复部分酶活性。
抑制剂	DIFP 或 PMSF
蛋白酶 K受DIFP 或 PMSF（终浓度5mM）抑制而不受EDTA、碘乙酸、胰蛋白酶特异性抑制剂TLCK、胰凝乳蛋白酶特异性抑制剂TPCK及对氯巯基苯甲酸等抑制。

制备指南

注意：金普诺安分子生物学级蛋白酶K冻干粉并非GMP产品。分子生物学级的蛋白酶K冻干粉并非完全无菌制剂。配置蛋白酶K无菌储存溶液首先将干粉溶解于稀释缓冲液【20mM Tris-HCl（pH 7.4）, 1 mM CaCl2】或【20mM Tris-HCl（pH 7.4）, 1 mM CaCl2, 2% 甘油】中，之后用0.22 µm过滤器除菌过滤。建议配制浓度20-40mg/ml，除菌过滤后蛋白酶K溶液在室温和低温下均可长期保持酶活。建议低温保存。金普诺安液体酶制剂均为无菌制剂，冻干粉制剂可按照客户要求进行无菌处理，需要额外费用，详情请垂询。
稳定性	冻干粉制剂（GPK003001）可常温运输，密闭保存于4°C以下干燥环境中效期为3年。液体制剂（GPK003002）可在常温条件下运输，未开封常温保质期为1年，开封使用后建议放置-20摄氏度冰箱保存。
推荐使用缓冲液：稀释缓冲液: 20mM Tris-HCl（pH 7.4），1 mM CaCl2 或 20mM Tris-HCl（pH 7.4）, 1 mM CaCl2， 2% 甘油储存缓冲液: 20mM Tris-HCl（pH 7.4）， 1 mM CaCl2，50% 甘油金普诺安蛋白酶K冻干粉制剂及液体酶制剂均有极高的稳定性。在常温/室温条件下短期运输储存不会造成酶活损失。

提醒与声明

本产品用于科研和生产制备，不可用作药物用途。

本产品获得相关许可用于制革、纺织、食品加工及化妆品等工业领域。

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注意：金普诺安分子生物学级蛋白酶K冻干粉并非GMP产品。分子生物学级的蛋白酶K冻干粉并非完全无菌制剂。配置蛋白酶K无菌储存溶液首先将干粉溶解于稀释缓冲液【20mM Tris-HCl（pH 7.4）, 1 mM CaCl2】或【20mM Tris-HCl（pH 7.4）, 1 mM CaCl2, 2% 甘油】中，之后用0.22 µm过滤器除菌过滤。建议配制浓度20-40mg/ml，除菌过滤后蛋白酶K溶液在室温和低温下均可长期保持酶活。建议低温保存。金普诺安液体酶制剂均为无菌制剂，冻干粉制剂可按照客户要求进行无菌处理，需要额外费用，详情请垂询。
稳定性	冻干粉制剂（GPK003001）可常温运输，密闭保存于4°C以下干燥环境中效期为3年。液体制剂（GPK003002）可在常温条件下运输，未开封常温保质期为1年，开封使用后建议放置-20摄氏度冰箱保存。
推荐使用缓冲液：稀释缓冲液: 20mM Tris-HCl（pH 7.4），1 mM CaCl2 或 20mM Tris-HCl（pH 7.4）, 1 mM CaCl2， 2% 甘油储存缓冲液: 20mM Tris-HCl（pH 7.4）， 1 mM CaCl2，50% 甘油金普诺安蛋白酶K冻干粉制剂及液体酶制剂均有极高的稳定性。在常温/室温条件下短期运输储存不会造成酶活损失。